La méthode d’essai macro-moléculaire in vitro est une méthode biochimique in vitro qui peut être utilisée pour identifier des produits chimiques (substances et mélanges) susceptibles d’induire des lésions oculaires graves, ainsi que des produits chimiques ne relevant d’aucune classification pour irritation oculaire ou lésions oculaires graves. La méthode d’essai macro-moléculaire in vitro exploite un mélange réactif macro-moléculaire composé de protéines, de glycoprotéines, de glucides, de lipides et d’éléments à faible masse moléculaire qui, une fois réhydraté, forme une matrice macro-moléculaire complexe qui reproduit la structure hautement organisée et transparente de la cornée. L’opacité cornéenne est considérée comme le principal critère de classification des dangers pour l’œil. Les produits chimiques testés provoquant la dénaturation, le dépliement et des changements de conformation des protéines induisent une désorganisation et une désagrégation de la structure hautement organisée de la matrice macro-moléculaire, ce qui génère une turbidité du réactif macro-moléculaire. À l’aide d’un spectromètre, ce phénomène peut être quantifié en mesurant les changements de diffusion de la lumière à une longueur d’onde de 405 nm et en comparant ces valeurs à une courbe d’étalonnage (établie en parallèle en mesurant la hausse de la densité optique (DO) induite par une série de substances étalon).